多肽合成儀的校準是保障合成產(chǎn)物純度、產(chǎn)率及實驗重復性的核心環(huán)節(jié)，需針對進液精度、溫度控制、壓力穩(wěn)定性、檢測系統(tǒng)等關鍵模塊開展系統(tǒng)性校準。以下為符合行業(yè)規(guī)范的分步校準流程，適用于主流固相多肽合成儀。
一、校準前準備：環(huán)境與設備預處理
環(huán)境條件確認：將實驗室溫度穩(wěn)定在20-25℃(波動≤±1℃)，相對濕度控制在40%-60%，避免氣流直吹設備。校準前1小時啟動設備預熱，確保各模塊處于穩(wěn)定工作狀態(tài)。
工具與標準物質(zhì)準備：準備經(jīng)計量認證的標準設備(如0.01mg級電子天平、標準溫度計、精密壓力計、100μL標準移液管)，以及無水甲醇(色譜純)、茚三酮標準溶液(0.1mol/L)等校準用試劑。
設備清潔與檢查：拆卸進液管路、反應柱，用無水甲醇沖洗3次后晾干；檢查氮氣鋼瓶壓力(≥0.5MPa)，更換老化密封墊，確保管路無泄漏。
二、核心模塊校準：精準控制關鍵參數(shù)
(一)進液系統(tǒng)校準：保障試劑計量精度
進液泵流量校準：選取常用進液體積(10μL、50μL、100μL)，設定進液速率10μL/s，將進液管路末端插入預先稱重的潔凈離心管中，啟動進液程序。每個體積梯度重復3次，用電子天平稱量收集的無水甲醇質(zhì)量，根據(jù)甲醇密度(20℃時0.7918g/mL)計算實際進液體積，誤差需≤±2%，否則調(diào)整泵體壓力或更換密封圈。
試劑分配精度校準：將不同試劑管路分別連接至標準移液接口，設定單次分配量50μL，重復分配10次至容量瓶中，用容量法驗證總體積誤差，確保≤±1%；同時檢查多管路同步分配時的時間差，需≤0.5秒。
(二)溫度與壓力系統(tǒng)校準：穩(wěn)定反應環(huán)境
反應溫度校準：將標準溫度計插入反應柱內(nèi)部(貼近樹脂區(qū)域)，分別設定25℃、30℃、40℃三個常用溫度點，保溫30分鐘后讀取溫度值，每個點重復3次，誤差需≤±0.5℃。若超標，通過設備溫控模塊參數(shù)修正或更換加熱元件。
氮氣壓力校準：關閉反應柱出口，將精密壓力計接入氮氣進氣口，設定壓力0.1MPa、0.2MPa、0.3MPa，穩(wěn)定5分鐘后讀數(shù)，誤差需≤±0.01MPa。校準后測試氮氣吹掃速率，確保樹脂翻動均勻且無飛濺。
(三)檢測與控制模塊校準：保障過程監(jiān)控準確
茚三酮檢測系統(tǒng)校準：配制濃度為0.01mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L的茚三酮標準溶液，通過設備自動進樣檢測，記錄吸光度值并繪制標準曲線，相關系數(shù)需≥0.995。若線性不佳，清潔檢測光路或更換光源。
程序控制校準：編寫標準合成程序(含脫保護、洗滌、偶聯(lián)3個步驟)，記錄各步驟實際執(zhí)行時間與設定時間的偏差，每個步驟重復5次，偏差需≤±1秒。檢查步驟切換時的管路切換響應，確保無試劑殘留交叉污染。
三、校準后驗證與記錄：確保校準有效性
空載運行驗證：執(zhí)行校準后的空載合成程序，連續(xù)運行3個循環(huán)，檢查各模塊運行狀態(tài)，確保無漏液、異響、參數(shù)漂移等問題。
標準肽合成驗證：選擇標準五肽(如Leu-Enkephalin)進行合成，通過HPLC檢測產(chǎn)物純度，需≥95%，且與歷史校準后數(shù)據(jù)偏差≤±2%，確認校準效果。
校準記錄存檔：詳細記錄校準日期、環(huán)境條件、校準人員、標準設備編號、各模塊校準數(shù)據(jù)及偏差值，粘貼校準合格標識，明確下次校準周期(建議每6個月一次，或合成500次后提前校準)。
